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|---|---|
| 類別 | 食品輸入及查驗登記 |
| 法規性質 | 法規命令 |
| 法規名稱 | 健康食品之護肝功能評估方法(針對化學性肝損傷) |
| 條文內容 | <p style="text-align: center;"><strong><span style="font-family: 標楷體; font-size: 14pt;">健康食品之護肝功能評估方法</span></strong><strong><span style="font-family: 標楷體; font-size: 14pt;">(</span></strong><strong><span style="font-family: 標楷體; font-size: 14pt;">針對化學性肝損傷</span></strong><strong><span style="font-family: 標楷體; font-size: 14pt;">)</span></strong><strong> </strong></p><p style="text-align: center;"><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span> </p><p style="text-align: right;"><span style="font-family: 標楷體; font-size: 10pt;">890731</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 10pt;">衛署食字第</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 10pt;">0890003826</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 10pt;">號公告 </span></p><p style="text-align: right;"><span style="font-family: 標楷體; font-size: 10pt;">920829</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 10pt;">衛署食字第</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 10pt;">0920401629</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 10pt;">號公告修正 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">壹、前言 </span></p><p style="margin: 6pt 0cm 0pt;"><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">肝臟為人體最大、機能最複雜的重要代謝器官。它在醣、脂質、蛋白質、維生素、激素、膽汁等物質代謝中，均有重要作用；同時肝臟還有分泌、排泄、生物轉化等方 面的功能。肝細胞含有豐富的肽，並合成許多肽和某些凝血因子，儲存和釋放造血因子，參與血液凝固和造血過程。肝臟也是機體重要屏障器官，其解毒功能對機體 有重要保護作用。當肝功能損傷時則代謝障礙，並影響其他臟器功能，嚴重則危及生命。肝臟具有肝動脈和門靜脈的雙重血液供應，並擁有大量血竇，肝細胞膜能直 接與血液接觸，同時肝細胞膜的通透性又較大，故肝細胞與血液進行活躍有效的物質交換。很多有毒物質易引起肝細胞損傷，肝具有強大再生和代償能力，對輕度或 局限性損傷往往不致造成肝功能障礙。肝臟對各種致病因子的反應方式，主要是肝實質細胞和星狀細胞增生與肝實質細胞的變性和壞死，以及肝間質的滲出和增生。 當肝細胞壞死，而剩餘肝細胞再生的情況下，則發生纖維增生導致肝硬化。在肝硬化時使靜脈血流受阻，導致肝靜脈與門靜脈壓上升，促進肝內動靜脈吻合支的形 成，致使肝細胞供血減少，進而發生變性或壞死、纖維增生，肝硬化更加嚴重，這樣形成惡性循環。當肝嚴重損傷，且代償能力顯著減弱時，則出現嚴重肝功能障礙 稱肝功能不全，進一步發展則肝功能衰竭，引起中樞神經系統功能障礙，出現肝昏迷。中醫學認為肝的主要功能藏血、主魂、主目、主筋膜和主疏泄，與脾胃的升降 密切相關，與膽互為表裡。肝氣鬱結則出現脅肋脹滿、精神抑鬱、納食不化、脘痞腹脹，甚則黃疸等症候。 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">國人肝臟疾病罹患率甚高，慢性肝病及肝硬化為十大死亡原因之第六位，每年死亡人數在三千人以上。造成肝臟疾病之主要因素有病毒性、酒精性與化學性三大類，而 在老鼠動物模式之病理切片中與人體有一致之病理現象者為化學性肝損傷。由於造成病毒性、酒精性肝損傷之動物模式不易建立，因此本評估方法僅針對化學性肝損 傷進行護肝功能之評估。所以本評估方法之進行主要是以四氯化碳（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">CCl4</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">） 誘導大（小）白鼠慢性肝損傷的實驗模式，探討不同試驗樣品之處理對於大（小）白鼠慢性肝損傷之影響。四氯化碳誘導肝損傷之原理，主要是因四氯化碳受肝微粒 酵素活化成三氯甲烷自由基，然後與蛋白質結合導致蛋白質合成受阻，並引起脂質分解代謝失調，引起肝細胞內三酸甘油酯蓄積，另外三氯甲烷自由基形成過氧化 物，導致脂質過氧化而使得肝細胞膜損傷，造成肝中酵素滲出及細胞病變而壞死。本評估方法將於日後再予以適當增加肝功能評估項目，以加強肝功能評估之完整 性。另外，本評估方法目前僅針對化學性肝損傷進行護肝功能之評估，未來陸續將病毒性、酒精性肝損傷護肝功能之評估方法納入。 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">貳、實驗項目與實驗方法 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">一、實驗設計： </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">將研究組別【每組</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">10-12</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">隻雄性</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">SD</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">或</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Wistar</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">大白鼠（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">200-250</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">克）或</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">ICR</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">小白鼠（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">20-25</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">克）】分為</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1.</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">正常對照組：正常飲食組；</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">2.</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">負對照組：四氯化碳處理組；</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">3.</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">正對照組：</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Silymarin</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">處理組；實驗組：試驗樣品處理組（需有二種或以上劑量組，其中之一為人體建議攝取量，另一組則為人體建議攝取量之</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">5-10</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">倍左右） </span></p><p style="margin: 6pt 0cm 0pt;"><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">四氯化碳誘導大（小）白鼠慢性肝損傷的方法</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(Lin et al.,1993)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">： </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1.</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">實驗方法：四氯化碳誘發大（小）白鼠慢性肝損傷實驗模式，本方法中之四氯化碳使用劑量僅供參考。 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">實驗前將大（小）鼠以亂數法大別為至少四組，每組</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">10-12</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">隻： </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> A</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">組為正常對照組：</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">I.P.</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">或灌食</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">olive oil (or corn oil) </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">十 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Normal saline or d.d.H2O (P.O.)</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> B</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">組為負對照組（肝損傷組）：</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">I.P. (40</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">％</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> CCl4</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">／</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">olive oil or corn oil) </span></p><p style="text-indent: 40.5pt;"><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">或灌食</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(20</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">％</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> CCl4</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">／</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">olive oil or corn oil)</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">十</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> Normal saline or d.d.H2O (P.O.)</span> </p><p style="text-indent: 24pt;"><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">C</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">組為正對照組（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Silymarin</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">治療對照組）：</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">I.P. (40</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">％</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> CCl4</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">／</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">olive oil or </span></p><p style="text-indent: 33.75pt;"><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">corn oil) </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">或灌食</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(20</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">％</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> CCl4</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">／</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">olive oil or corn oil)</span></p><p style="text-indent: 135pt;"><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">十</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> Silymarin (P.O.)</span> </p><p style="text-align: center;"><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span></p><p style="text-indent: 13.5pt;"><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">D</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">組為實驗組：</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">I.P. (40</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">％</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> CCl4</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">／</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">olive oil or corn oil) </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">或灌食</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(20</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">％</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> CCl4</span></p><p style="text-indent: 27pt;"><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">／</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">olive oil or corn oil)</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">十</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">試驗樣品</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> (P.O.</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">） </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">2</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">．步驟： </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> A</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">組腹腔注射</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">olive oil </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">或</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> corn oil (0.1 ml/100 g BW for rats, 4 µl/100 g BW for mice) </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">或灌食</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">olive oil </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">或</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> corn oil (0.5 ml/rat)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">，</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">B-D</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">組腹腔注射</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">40</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">％</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> CCl4</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">／</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">olive oil or corn oil (0.1 ml/100 g BW for rats, 4 µl/100 g BW for mice) </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">或灌食</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">20</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">％</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> CCl4</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">／</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">olive oil or corn oil (0.5 ml/rat)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">，每週兩次（星期一及四）；並於星期二、三、五、六或每日，在</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">A</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">、</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">B</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">組以胃管灌胃</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Normal saline or d.d.H2O</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">，在</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">C</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">組灌胃予</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Silymarin (200 mg/kg for rats or mice)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">，在</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">D</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">組則灌胃予試驗樣品，共為期八週之久。所有實驗動物分別於第一週、第三週及第六週投予試驗樣品（或</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Normal saline or d.d.H2O</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">或</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Silymarin</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）後</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">2</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">小時，以尾部採血方式檢測肝臟的生化功能：</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">GOT (AST)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">、</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">GPT (ALT)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">、</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">TG</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">、</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Cholesterol</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">。最後於第八週結束時全部犧牲，以頸動脈或腹大動脈採血檢驗肝臟生化功能，並剖腹取肝臟標本，秤重後將最大右葉肝割取兩塊</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l cm x l cm Block</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">固定於</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">10</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">％的中性福馬林（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Formaline</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）液中，石蠟包封切片後分別作</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">HE </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">、</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> Masson </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">、</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> Reticulin stain</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">來進行病理學觀察。另外將其餘肝臟依解剖相關位置分為五袋，分別進行檢測抗氧化成分</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">GSH</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">與</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">GSH Px</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">、</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">GSH Rd</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">、</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">SOD</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">、</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Catalase</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">等酵素活性‧ </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">二、實驗測定項目： </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">（一）血清：測定與肝傷害相關之成分或酵素活性 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1.</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">GOT (AST)</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">2.</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">GPT (ALT)</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">3.</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">TG</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">4.</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Cholesterol</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">（二）肝臟：測定各種與抗氧化功能相關之成分或酵素活性 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1.</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Glutathione (GSH)</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">2.</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Glutathione reductase (GSH Rd)</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">3.</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Glutathione peroxidase (GSH Px)</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">4.</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Superoxide dismutase (SOD)</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">5.</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Catalase</span> </p><p style="margin: 6pt 0cm 0pt;"><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">肝功能生化指數的檢測： </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">所有大白鼠血液樣品在室溫下放置一小時以使其凝結。再以冷凍離心機於</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">4<sup>o</sup>C</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">下每分鐘</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">12000 rpm</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">離心</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">5</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分鐘，來分離血清</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(Lin et al., 1997)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">。再以自動生化分析儀檢測肝功能生化指數，如</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">GOT (AST)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">、</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">GPT (ALT)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">、</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">TG</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">、</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Cholesterol</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">等，其中</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">GOT (AST)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">及</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">GPT (ALT)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">檢測原理是依據</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Reitman</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">＆</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Frankel (1957)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">及國際聯邦臨床化學（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">IFCC,1986a,b</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）的標準方法。 </span></p><p style="margin: 6pt 0cm 0pt;"><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">抗氧化功能相關之成分或酵素活性之分析 </span></p><h3><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt; font-weight: normal;">麩胱甘肽</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt; font-weight: normal;">(glutathione, GSH)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt; font-weight: normal;">濃度之分析</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span></h3><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">參考</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Reed</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">等</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(1980)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">的方法。取肝組織約</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">0.3</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">克，加入</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">9</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">倍</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(V/W)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">的</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">50 mM</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">磷酸鉀緩衝液</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(pH 7.0)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">均質</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分鐘，得肝臟均質液樣品。肝臟均質後，迅速取均質液</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">400 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">m</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">加入等量</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">10</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">％ 過氯酸</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(perchloric acid, PCA)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">混合後，靜置</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">40</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分鐘，使</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">PCA</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">能將樣品中還原態麩胱甘肽</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(GSH)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">充分溶出後，於</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">4 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">℃</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">下以</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">5000 rpm </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">離心</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">3</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分鐘，取上層液待測。至於沉澱部份則加入</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1 ml 1N NaOH</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">溶解，再刮入</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">eppendrof</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">中以分析蛋白質。另取以</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">0.0085g</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">之還原態麩胱甘肽及</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">0.0072g</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">之氧化態麩胱甘肽所製備好的標準品與上述所得之樣品各</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">400 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">m</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">，加入</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">40 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">m</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">碘乙酸</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(iodoacetic acid, IAA: 100 mM)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">，使還原態麩胱甘肽能與</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">IAA</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">結合後，給予還原態麩胱甘肽多攜帶一負電荷，以便在</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">HPLC</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分析中能比</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">GSSG</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">早分離出來；再緩慢加入碳酸氫鉀</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(KHCO<sub>3</sub>)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">直到不再起泡為止，此時已中和酸而成微鹼性，以便可在高效能液相層析儀</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(HPLC)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">中分析。然後置於暗處</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">15</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分鐘後，再加入</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">440 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">m</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l 3 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">％</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> 2,4-</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">二硝基氟苯</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(FDNB)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">振盪混合使與硫元素反應成黃色物質，而此黃色物質可在紫外光偵測器</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(UV detector: </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">λ</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">=365 nm)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">中被偵測出來。之後經八小時的冷藏，再以</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">5000 rpm (1800</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">×</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">g)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">離心</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">3</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分鐘，取上層液並以注射筒過濾器</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(syringe filter: 4 mm filter unit, 0.45 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">m</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">m Nylon)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">濾除雜質。最後以高效能液相層析儀進行分析。 </span></p><h3 style="margin: 6pt 1.7pt 0pt 0cm;"><a name="_Toc390108462"></a><a name="_Toc390797669"></a><a name="_Toc390784663"></a><a name="_Toc359057825"></a><a name="_Toc390542606"></a><a name="_Toc390528220"></a><a name="_Toc390443324"></a><a name="_Toc358859293"></a><a name="_Toc358859010"></a><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt; font-weight: normal;">麩胱甘肽過氧化酶</span> <span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt; font-weight: normal;">(glutathione peroxidase, GSH Px)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt; font-weight: normal;">活性分析</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span></h3><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">此酵素之分析主要是依據</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Lawrence</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">與</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Burk (1976)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">所報告之方法。活性測定係以過氧化氫</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">為受質。還原態麩胱甘肽</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(GSH)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">經由麩胱甘肽過氧化酶</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(GSH Px)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">之催化可將過氧化氫還原，而還原態麩胱甘肽則變成氧化態麩胱甘肽，然後氧化態麩胱甘肽則利用麩胱甘肽還原酶</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(GSH Rd)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">與</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">NADPH</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">將其還原回還原態麩胱甘肽。取肝臟細胞質樣品</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">5 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">m</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">及</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">95 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">m</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l 20 mM</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">磷酸鉀緩衝液</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(pH 7.0)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">，加入</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">0.8 ml 100 mM </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">磷酸鉀緩衝溶液</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(pH 7.0)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">之反應混合液</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">含</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1 mM EDTA</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">、</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1 mM NaN<sub>3</sub></span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">、</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">0.2 mM NADPH</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">、</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1 U/ml GSH Rd</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">及</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1 mM GSH)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">，在室溫下靜置五分鐘，再加入</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">0.1 ml 2.5 mM</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">過氧化氫後，以分光光度計在</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">340 nm</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">下測三分鐘</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(25 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">℃</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">，計算</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">NADPH</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">減少之速率，間接求出麩胱甘肽過氧化酶的活性，而以去離子水</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">5 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">m</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">當作空白組。比活性</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(specific activity)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">表示法：</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">nmol NADPH/min/mg protein</span> </p><h3 style="margin-top: 6pt;"><a name="_Toc390108463"></a><a name="_Toc390797670"></a><a name="_Toc390784664"></a><a name="_Toc359057826"></a><a name="_Toc390542607"></a><a name="_Toc390528221"></a><a name="_Toc390443325"></a><a name="_Toc358859294"></a><a name="_Toc358859011"></a><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt; font-weight: normal;">麩胱甘肽還原酶</span> <span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt; font-weight: normal;">(glutathione reductase, GSH Rd)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt; font-weight: normal;">活性分析</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span></h3><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">麩胱甘肽還原酶活性分析是依據</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Bellomo</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">等</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(1987)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">的方法。分析時取</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">10 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">m</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">肝臟細胞質樣品及</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">90 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">m</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l 20 mM</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">磷酸鉀緩衝液</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(pH 7.0)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">加入</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">0.9 ml</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">含有</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1.1 mM MgCl<sub>2</sub></span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">·</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">6H<sub>2</sub>O</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">、</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">5.0 mM GSSG</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">及</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">0.1 mM NADPH</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">之</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">100 mM</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">磷酸鉀緩衝液</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(pH 7.0)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">，再以分光光度計在</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">340 nm</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">下測五分鐘</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> (25 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">℃</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">，計算</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">NADPH</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">減少的速率，其中以</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">10 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">m</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">之去離子水作為空白組。比活性</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(specific activity)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">表示法：</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> nmol NADPH/min/mg protein</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">超氧化物歧化酶（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">superoxide dismutase, SOD</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）活性分析 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">實驗參照</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Marklund </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">與</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Marklund (1974)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">所描述之方法進行，將肝組織用冰食鹽水（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">ice</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">–</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">cold saline</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）洗淨，在漏斗上滴乾鹽水，加入適量緩衝液（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">0.32 mol</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">／</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l sucrose</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">、</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l mmol</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">／</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l EDTA</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">、</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">10 nmol</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">／</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l Tris-HCl, pH 7.4</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）打碎使成</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">10</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">％之均質漿（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">homogenate</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）。高速離心</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">30</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分鐘（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">13600 xg</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">），取上清液</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">50 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">m</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">，再加上</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> Tris</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">–</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">cacodylic acid buffer</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">pH 8.2, 50 mM</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">100 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">m</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">。溶液再加上超純水，使體積成為</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">980 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">m</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">，再加上鄰苯三酚（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">pyrogallol</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">20 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">m</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">0.2 mM</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">），劇烈搖盪混均，以分光光度計於</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">420 nm</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">測量吸光值（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">A</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">），每隔</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">20</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">秒測量一次，總共測量</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">5</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分鐘，計算△</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">A</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">／△</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">T</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">。 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分析過程中以</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">SOD</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">標準品，作出標準線（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">standard curve</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">），再進行分析。單位時間內抑制鄰苯三酚自動氧化速率達</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">50 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">％時之酵素量，定為一單位（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">U</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">; </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">肝組織</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">S0D</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">活性，以每單位蛋白質所含</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">SOD</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">單位量表示（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">U per milligram of protein</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）。</span> </p><p style="margin: 6pt 0cm 0pt;"><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">過氧化氫酶（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">catalase, CAT</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）活性分析 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">實驗參照</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Aebi (1984)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">所描述之方法進行。將肝組織用冰食鹽水（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">ice</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">–</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">cold saline</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）洗淨，在漏斗上滴乾鹽水，加入適量磷酸鹽緩衝溶液，打碎使成</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">10 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">％之均質漿（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">homogenate</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）。離心（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">700 xg</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">10</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分鐘，取上層液</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">9</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">份加入</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">份</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Triton X-100 (1 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">％）成為</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">stock homogenate (S.H.</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）。取</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">S.H. </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">加入適量之磷酸緩衝溶液進行稀釋，調整酸鹼度至</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">pH 7</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">成為</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">dilute homogenate (D.H.) </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">。取</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">D.H. 2 ml</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">加入</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l ml H2O2 (0.03 M)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">，劇烈搖盪混均，以分光光度計於溫控</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">25</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">℃</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">、波長</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">240 nm</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">之條件下測量吸光值</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(A</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">），每隔</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">15</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">秒測量一次，總共測量</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">2</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">次，計算求得反應速率常數</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">K</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">。 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> K</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">＝（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">2.3</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">／△</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">t</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">log(Al</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">／</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">A2)</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">△</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">t: </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">時間間隔</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(15</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">秒鐘</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">)</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> A1: T1</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">時段，樣品之吸光值</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">-</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">空白吸光值。 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> A2: T2</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">時段，樣品之吸光值</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">-</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">空白吸光值。 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">肝組織</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">CAT</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">活性，以每單位蛋白質所含反應速率</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">K</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">表示之 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> (K per milligram of protein</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）。 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">蛋白質濃度之測定</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"><br></br> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">實驗參照</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Lowry </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">等</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(1951)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">之方法進行。取適量蛋白質樣品，並以</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1 N NaOH</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">來調整使其最終體積為</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">100 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">m</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">，加入</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">200 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">m</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">去離子水及</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">100 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">m</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">l</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">反應混合液</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(25</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">％</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> Na<sub>2</sub>CO<sub>3 </sub>: 2</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">％</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> Na-K-tartarate : 1</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">％</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> CuSO<sub>4 </sub>= 8 : 1 : 1, v/v/v)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">，然後在室溫下靜置</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">10</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分鐘，加入</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1 ml Folin reagent (Folin : H<sub>2</sub>O = 1 : 19.5)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">後於</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">37 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">℃</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">水浴</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">20</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分鐘，並在室溫下冷卻，最後在分光光度計以</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">660 nm</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">下測其吸光值</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(25 </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">℃</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">。然後將標準曲線做線性回歸，得一方程式，將所得樣品之吸光值代入此一元一次方程式，換算後即可得知樣品之蛋白質含量。 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">（三）病理切片觀察 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">組織病理學的觀察： </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">在八星期結束時，所有大白鼠均予以犧牲，頸動脈採血後，割取肝臟，在最大右葉的同一位置割取</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">公分見方的肝組織，放入</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">10</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">％的中性福馬林中，做進一步的病理染色，其餘五葉肝臟則置於</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">-80</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">℃</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">的冷凍櫃中冷凍，以便檢測抗氧化酵素的活性。為了觀察慢性肝損傷時，肝細胞的受損、脂肪變性、壞死、纖維化等變化，因此除了將肝組織做</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">HE stain</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">之外，還做網狀纖維及膠原纖維的特殊染色（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Reiticulin silver stain & Masson stain</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">），以便評估肝纖維化程度。 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">在進行組織病理學的比較時，可以</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Jonker</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">等</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(1992)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">的半定量方法，對慢性肝損傷時，肝細胞發炎的程度、脂質變性、肝細胞壞死及膽管增生等予以半定量分析。評估分數是由</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> ”0” </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">到</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> ”4” </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分，其中</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> ”0”</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">代表沒有</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(absent)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">；</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">”1” </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">代表少量</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(trace</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）；</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">”2” </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分代表輕微（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">weak</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）；</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">”3” </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分代表中等程度（</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">moderate</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">）；</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">”4”</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分代表極嚴重</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(strong)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">。而對肝纖維化的半定量分析，則可以依據</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Ruward</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">等</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(1989)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">及</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Gabriele</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">等</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(1997)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">的方法，將肝纖維化區分為以下五個等級：</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">”0” </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分代表正常肝組織、沒有任何肝纖維化；</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">”1” </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分代表有膠原的增生，但沒有形成中隔（在中央靜脈或門脈區有放射狀纖維增生）；</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">”2” </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分代表在中央靜脈和門脈區二者間，形成不完全的中隔（此中隔彼此沒有交會）；</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">”3” </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分代表形成完整的中隔，中間彼此交會，並將肝實質分割成許多節片斷，但此中隔尚很薄；</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">”4” </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">分代表形成完全的中隔，且中隔變厚，亦即完全的肝硬化。 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">另外，為了避免觀察主觀上的偏差，所有的組織病理切片都是由最大右葉肝的同一位置切取下來，再去做病理染色。至於病理的半定量分析之評估，則最好是委請醫院病理科，在不清楚本實驗設計的情況下，對所有切片進行評分比較，最後再以統計分析方法進行各組差異性的分析。 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">三、實驗數據統計分析： </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">採用</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">SAS</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">電腦統計套裝軟體</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(SAS institute, Cary, NC)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">進行變異數分析</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(analysis of variance, ANOVA)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">，並以</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Duncan’s test</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">來測試不同處理間顯著差異效果</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">(P<0.05)</span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">。 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">參、評估方法之原則要求 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">一、血清：測定與肝傷害相關之成分或酵素活性 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">必作： </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1.GOT (AST)</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">2.GPT (ALT)</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">選作： </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1. TG</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">2. Cholesterol</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">二、肝臟：測定各種與抗氧化功能相關之成分或酵素活性 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">必作： </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1.Glutathione (GSH)</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">2.Glutathione peroxidase (GSH Px)</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">3.Superoxide dismutase (SOD)</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">4.Catalase</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">選作： </span></p><p style="text-indent: -18pt; margin-left: 36pt;"><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1.<span style="font: 7pt/normal times new roman; font-size-adjust: none; font-stretch: normal;"> </span></span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">Glutathione reductase (GSH Rd)</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">三、病理切片觀察 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">必作 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">四、其他相關之測定項目由送審單位自行評估是否需要執行。 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">肆、結果判定之基準 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">由以上血清與肝臟之各項測定值、病理切片觀察結果，並配合其他由送審單位送出之相關測定項目之數據，經統計分析後所得之客觀結果，再由審查委員進行評估。 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">參考文獻 </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">1.Aebi, H. 1984. Catalase in vitro. Methods in Enzymol. 105: 121-126.</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">2.Bellomo, G., Mirabelli, F., Dimonte, D., Richelmi, P., Thor, H., Orrenius, C. and Orrenius, S. 1987. Formation and reduction of glutathione-mixed disulfides during oxidative stress. Biochem. Pharmacol. 36: 1313-1320.</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">3.Gabriele B. 1997. Silymarin retards collagen accumulation in early and advanced biliary fibrosis secondary to complete bile duct obliteration in rats. Hepatology 26: 643-649.Internation Federation of Clinical Chemistry (IFCC). 1986a. J. Clin. Chem. Biochem. 24: 481-495.Internation Federation of Clinical Chemistry (IFCC). </span></p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> 1986b. J. Clin. Chem. Biochem. 24: 497-510.</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">4.Jonker, A.M., Dijkhuis, F.W.J., Boes, A., Hardonk, M.J. and Grond, J. 1992. Immunohistochemical study of extracellular matrix in acute galactosamine hepatitis in rats. Hepatology 15: 423-431.Lawrence, R.A. and Burk, R.F. 1976. Glutathione peroxidase activity in selenium-deficient rat liver. Biochem. Biophys. Res. Commun. 71: 952-958.</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">5.Lin, J.M., Lin, C.C., Chiu, H.F., Yang, J.J. and Lee, S.G. 1993. Evaluation of the anti-inflammatory and liver-protective effects of <em>Anoectochilus formosanus</em>, <em>Ganoderma lucidum</em> and <em>Gynostemma pentaphyllum</em> in rats. Am. J. Chin. Med. 21: 59-69.</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">6.Lin, S.C., Lin, Y.H., Chen, C.F., Chung, C.Y. and Hsu, S.H. 1997. The hepatoprotective and therapeutic effects of propolis ethanol extract on chronic alcohol-induced liver injuries. Am. J. Chin. Med. 25: 325-332.</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">7.Lowry, O.H., Rosebrough, N.J., Farr, A.L. and Randall, R. J. 1951. Protein easurement with the Folin phenol reagent. J. Biol. Chem. 193: 265-275.</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">8.Marklund, S. and Marklund, G. 1974. Involvement of the superoxide anion radical in the oxidation of pyrogallol and a convenient assay for superoxide dismutase. Eur. J. Biochem. 47: 469-474.</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">9.Reed, D.J., Babson, J.R., Beatty, P.W., Brodie, A.E., Ellis, W.W. and Potter, D.W. 1980. High-performance liquid chromatography analysis of nanomole levels of lutathione,glutathione disulfide, and related thiols and disulfides. Ana. Biochem. 106: 55-62.</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">10.Rietman, S. and Frankel, S. 1957. A colorimetric method for determination of serum lutamic oxalacetic and glutamic pyruvic transaminases. Am. J. Clin. Pathol. 25:56-63.</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;">11.Ruwart, M.J., Wilkinson, K.F., Rush, B.D. et al. 1989. The integrated value of serum procollagen III peptide over time predicts hepatic hydroxyproline content and stainable collagen in a model of dietary cirrhosis in the rat. Hepatology 10: 801-806.</span> </p><p><span style="font-family: 標楷體; font-size: 13.5pt;"> </span></p> |
| 發佈日期 | 2003-08-29 |
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